Erbliche Genetik: Aktuelle Forschung

Abstrakt

Vergleich der Zählung von CD34+- und CD45+-Zellen mittels drei verschiedener Fluoreszenzmethoden

Tzonka Godjevargova

Zusammenfassung:
Die E-Zählung der Stammzellen und Leukozyten in peripheren Blut- und Aphereseproben erfolgte anhand der Biomarkerexpression der Proteine ​​CD34+ und CD45+ auf ihrer Zelloberfläche. Ziel dieser Studie war das gleichzeitige Zählen lebender Stammzellen und Leukozyten in Aphereseproben unter Verwendung zweier verschiedener Fluoreszenzkonjugate. Das Konjugat aus dem monoklonalen Antikörper Anti-CD34 und dem Fluoreszenzfarbstoff DR110 färbte Stammzellen grün. Das Konjugat aus dem monoklonalen Antikörper Anti-CD45 und dem Fluoreszenzfarbstoff ATTO620 färbte Leukozyten rot. Die Konjugate Anti-CD34-Antikörper – DR110 und Anti-CD45-Antikörper – ATTO620 wurden mit der Carbodiimid-Methode hergestellt und durch Gelfiltration gereinigt. Die Zählung wurde mit einem neuen automatischen Fluoreszenzmikroskop EasyCounter BC durchgeführt. Die toten Zellen wurden mit dem Monomethincyanin-Farbstoff Sofia Green gezählt. Es wurden Analysen von sechs Aphereseproben durchgeführt. Die mit EasyCounter BC erzielten Ergebnisse wurden mit den Ergebnissen zweier anderer Standardmethoden verglichen – Durchflusszytometrie (Guava easyCyte 8HT) und Fluoreszenzmikroskopie (Olympus BX51). Die mit EasyCounter BC und dem Durchflusszytometer erzielten Zellzahlen waren sehr ähnlich. Die Variationskoeffizienten der mit EasyCounter BC erzielten Ergebnisse (3-6 %) waren niedriger als die mit dem Durchflusszytometer (5-8 %) und dem Olympus-Mikroskop (14-18 %).