Zeitschrift für mikrobielle und biochemische Technologie

Abstrakt

Vergleich zwischen zwei Erwinia carotovora L-Asparaginase II-Konstruktionen: Klonierung, heterologe Expression, Reinigung und kinetische Charakterisierung

Priscila Lamb Wink, Heique Marlis Bogdawa, Gaby Renard, Jocelei Maria Chies, Luiz Augusto Basso und Diógenes Santiago Santos

L-Asparaginase II aus Erwinia carotovora könnte eine wichtige alternative Therapie in der Behandlung akuter lymphatischer Leukämie im Kindesalter darstellen, trotz ihrer vielversprechenden niedrigeren Glutaminaseaktivität als die L-Asparaginasen II aus Escherichia coli und Erwinia chrysanthemi , die derzeit zur Behandlung dieser Krankheit eingesetzt werden. Hier beschreiben wir das Klonen, die Expression, die Reinigung und die Bestimmung der kinetischen Steady-State-Parameter für L-Asparaginase II aus E. carotovora: mit (AspSP) und ohne Signalpeptid (AspMP). AspMP wurde in einem einstufigen Protokoll mit 91 % Ausbeute bis zur Homogenität gereinigt, AspSP in einem zweistufigen Protokoll mit 28 % Ausbeute. Außerdem wiesen beide Enzyme ähnlich hohe spezifische Aktivitäten auf: 208,1 bzw. 237,6 U mg ^-1 . Die Km- und k _cat -Werte zeigten, dass AspMP eine geringere Glutaminaseaktivität als AspSP aufweist. Darüber hinaus wird AspMP durch ein einfacheres Reinigungsprotokoll und mit höherer Ausbeute hergestellt. Dieser Prozess kann für die Produktion im großen Maßstab geeignet sein und für Forscher und biopharmazeutische Unternehmen von Interesse sein.