Zeitschrift für Bakteriologie und Parasitologie

Abstrakt

Charakterisierung löslicher und membrangebundener Proteine ​​von Toxoplasma gondii als diagnostische Infektionsmarker

Imen Khammari, Sami Lakhal, Benoît Westermann, Alia Benkahla, Aïda Bouratbine, Alain Van Dorsselaer, Moncef Ben Saïd, Christine Schaeffer-Reiss und Fatma Saghrouni

In der vorliegenden Studie haben wir eine Kombination aus eindimensionaler Gelelektrophorese, Immunoblot und Nanoflüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (nanoLC-MS/MS) angewendet, um potentielle immunogene Proteine ​​von Tachyzoiten von Toxoplasma gondii zu identifizieren , die für die Entwicklung zuverlässiger Tests in der Serodiagnose erworbener Toxoplasmose bei immunkompetenten Personen verwendet werden können. Zu diesem Zweck haben wir einen Immunoblot mit löslichen und Membranextrakten von GT1- Tachyzoiten von Toxoplasma gondii entwickelt und 194 positive und 100 negative Seren von schwangeren Frauen getestet.

Fünf Bänder löslicher Antigene (98 kDa, 36 kDa, 33 kDa, 32 kDa und 21 kDa) und vier Bänder Membranantigen (41 kDa, 35 kDa, 32 kDa und 30 kDa) wurden als die wertvollsten in Bezug auf Sensitivität und Spezifität ausgewählt. Unter diesen Bändern zeigten nur zwei Bänder löslicher Antigene (33 kDa und 32 kDa) und zwei Bänder Membranantigen (32 kDa und 30 kDa) eine Spezifität von ≥ 90 %.

Nach Massenspektrometrie und bioinformatischer Analyse wurden 7 Proteine ​​als potenzielle Marker für die Serodiagnose von Toxoplasmose identifiziert. Diese Proteine ​​sind: SRS34A, GRA7, GRA1, DG32, MIC5, ROP5 und Toxofilin. Diese Proteine ​​zeigten eine 86- bis 100-prozentige Homologie mit Proteinen der VEG- und ME49-Stämme von T. gondii und eine 58- bis 87-prozentige Homologie mit Hammondia hammondi ; sie können als attraktive Kandidaten für die Entwicklung eines Immunchromatographietests angesehen werden, der für die schnelle Diagnose von Toxoplasmose und als Bestätigungstest verwendet werden kann, wenn Routinetechniken zweifelhafte Ergebnisse liefern.