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Abstrakt
Anwendung der CRISPR/cas9-gesteuerten homologen Rekombination zur Erzeugung menschlicher Tumorzellen mit bedingtem Knockout eines X-chromosomalen MicroRNA-Locus
Aurélie Van Tongelen, Axelle Loriot, Olivier De Backer und Charles De Smet
Die Untersuchung der zellulären Funktion von microRNAs erfordert genetische Strategien, um ihren Funktionsverlust zu erzeugen. Kürzlich wurde ein neuartiger Ansatz zur gezielten genomischen Deletion vorgeschlagen, der auf der Induktion ortsspezifischer DNA-Schnitte mit Cas9/gRNA-Ribonukleoproteinkomplexen basiert, kombiniert mit der homologen rekombinationsabhängigen Insertion von Kassetten, die Sequenzen für Cre-lox- oder FLP-FRT-Systeme enthalten. Hier präsentieren wir einen technischen Bericht, der die Anwendung dieses CRISPR/Cas9-gesteuerten homologen Rekombinationsverfahrens zur Erzeugung menschlicher Tumorzellen beschreibt, in denen ein bedingter Knockout eines X-chromosomalen Clusters von microRNAs (miR-105/miR-767) induziert werden kann. Wir beschreiben die aufeinanderfolgenden Schritte der genetischen Manipulation und Zellklonauswahl, die es uns ermöglichten, Zellen mit der erwarteten Genombearbeitung zu erzeugen.