Zeitschrift für Pflanzenpathologie und Mikrobiologie

Abstrakt

Anwendung und Bewertung des Loop-Mediated Isothermal Amplification Assays zur Erkennung von aflatoxigenen Pilzkontaminanten in Reiskörnern in Kenia

Youmma Douksouna*, Allan Ole Kwallah, Andrew Nyerere, Steven Runo

Aflatoxigene Pilze sind die häufigsten filamentösen Pilze, die Aflatoxine synthetisieren und die wichtigsten Pilzpathogene für landwirtschaftliche Produkte darstellen. Aflatoxine bleiben eine große Bedrohung für die globale Nahrungsmittelsicherheit, diese Moleküle könnten während der Verarbeitung in Lebensmittel gelangen und darüber hinaus in der Nahrungskette verbleiben. Aflatoxine sind krebserregend, hepatotoxisch, mutagen, teratogen, können zahlreiche Stoffwechselsysteme hemmen und haben immunsuppressive Eigenschaften. Studien an aflatoxigenen Stämmen können dazu beitragen, Strategien zur Kontrolle und Vorbeugung einer Kontamination mit aflatoxigenen Pilzen und der Aflatoxinproduktion in Lebensmitteln zu verbessern. In dieser Studie basierte die Isolierung von Aspergillus-Arten auf morphologischen Merkmalen, einschließlich des Myzelwachstumsmusters, der Farbe und der Eigenschaften der Fruchtkörper der Pilze. Die innovative Technik des Loop-vermittelten isothermen Amplifikationstests wurde angewendet, um das Norsolorinsäure-Gen zu amplifizieren. Die Loop-vermittelte isotherme Amplifikation wurde durch eine Kombination aus Schnelligkeit, Einfachheit und Spezifität optimiert, um die Zielgenom-DNA in den Reaktionen zu erkennen. Die mit dem Loopamp Echtzeit-Turbidimeter überwachten Amplifikationskurven wurden analysiert, um aflatoxigene und nicht-aflatoxigene Stämme zu unterscheiden.

Insgesamt zeigten die Ergebnisse, dass die Methode der Loop-vermittelten isothermischen Amplifikation bei der Erkennung aflatoxigener Stämme mit einer hohen Spezifität von 71,5 % und Sensitivität bei niedrigeren DNA-Konzentrationen wirksam war. Darüber hinaus war sie schneller als die herkömmliche Polymerase-Kettenreaktion. Der in dieser Studie beschriebene Loop-vermittelte isothermische Amplifikationstest könnte ein vielversprechendes Instrument zur Vorhersage potenzieller Bedrohungen durch aflatoxigene Pilze und des Aflatoxinrisikos in Lebensmitteln und Rohstoffen sein.