Zeitschrift für Bakteriologie und Parasitologie

Abstrakt

Eine einfache visuelle Nachweismethode für das menschliche Zika-Virus mittels Reverse Transcription Loop Mediated Isothermal Amplification

Yang Li1,2, Zhenzhou Wan3, Yi Zhou2,4, Xia Jin5, Haifeng Shi1* und Chiyu Zhang 2*

Das Zika-Virus (ZIKV) ist ein neu auftretender, von Mücken übertragener Krankheitserreger und gehört zur Familie der Flaviviridae, Gattung Flavivirus. Eine ZIKV-Infektion wurde mit Mikrozephalie und männlicher Unfruchtbarkeit in Verbindung gebracht. Die Überwachung einer ZIKA-Infektion ist wichtig für die menschliche Fortpflanzungsgesundheit und die Eindämmung der Virusausbreitung. Die Entwicklung eines schnellen und sensitiven Tests zum Nachweis von ZIKV ist in China und anderen südostasiatischen Ländern dringend erforderlich. Hier haben wir einen einstufigen, einröhrchenbasierten, durch eine Reverse-Transkription-Loop-vermittelte isotherme Amplifikation (RT-LAMP) durchgeführten Test zum Nachweis von ZIKV entwickelt. Der Test hat eine Nachweisgrenze (LOD) von 88 Kopien Zika-RNA pro 25 μl Reaktion und kann innerhalb von 20 Minuten abgeschlossen werden, wenn die Vorlageneingabe die LOD übersteigt. Darüber hinaus weist er eine hohe Spezifität und gute Reproduzierbarkeit auf. Wichtig ist, dass das Ergebnis durch eine kolorimetrische Veränderung visualisiert werden kann, wenn HNB oder Calcein verwendet wird. Um die Durchführbarkeit des Tests zu bewerten, wurde ein Vergleich zwischen dem RT-LAMP-Test und einem konversionsstärkeren RT-qPCR unter Verwendung von 20 Zellkulturüberständen und drei Urinproben durchgeführt. Der ZIKV RT-LAMP-Test zeigte eine perfekte Übereinstimmung bei der Erkennung mit dem RT-qPCR. Diese Ergebnisse zeigen, dass der neu entwickelte ZIKV RT-LAMP einfach, schnell und gut für die ZIKV-Überwachung geeignet ist, insbesondere in ressourcenarmen Regionen.