Zeitschrift für Pflanzenpathologie und Mikrobiologie

Abstrakt

Eine einfache, schnelle und effiziente Methode zur Isolierung von RNA des Pepino-Mosaik-Virus aus Tomatenfrüchten

Amal Souiri, Mustapha Zemzami, Khadija Khataby, Hayat Laatiris, Saaid Amzazi und Moulay Mustapha Ennaji

Das Hauptanliegen beim molekularen Nachweis von RNA-viralen Pathogenen in Pflanzen ist das Erreichen einer guten Qualität der extrahierten RNA. Es stehen verschiedene Methoden zur Isolierung von RNA aus polysaccharidreichen und -armen Geweben und anderen widerspenstigen Pflanzen zur Verfügung. Die Verwendung zeit- und reagenzienintensiver Methoden sowie solcher, bei denen gefährliche Chemikalien zum Einsatz kommen, ist jedoch ziemlich umständlich und problematisch, insbesondere wenn dies für bestimmte Zwecke, wie die Isolierung viraler RNA aus Tomatenfrüchten, nicht erforderlich ist, was das Ziel dieses Artikels ist. Wir beschreiben eine alternative, einfache und schnelle Methode zur Herstellung viraler RNA aus Tomatenfrüchten ohne RNA-Extraktions- und Reinigungsschritte am Beispiel des Pepino-Mosaikvirus ( PepMV ).

Die Methode verwendet mechanische Behandlung und Suspension in Wasser. Die Qualität der erhaltenen RNA wurde durch spektrometrische Messungen beurteilt und in RT-PCR-Tests validiert. Das verwendete Protokoll wurde mit der üblichen TRIzol-Methode verglichen. Die Ergebnisse zeigten, dass die Ausbeute und die Qualität der mit der vorgeschlagenen Methode erhaltenen RNA im Vergleich zur TRIzol-Methode effizient und hoch sind. Darüber hinaus ermöglichte die entwickelte Methode erfolgreich eine empfindliche und reproduzierbare Erkennung der vorhergesagten PepMV- Bänder in RT-PCR. Somit kann die molekulare Erkennung von PepMV aus Tomatenfrüchten routinemäßig ohne anspruchsvolle RNA-Isolierung durchgeführt werden. Dies wird auch die Diagnose anderer RNA-Viren, die Tomatenpflanzen infizieren, einfacher und weniger zeitaufwändig machen, im Vergleich zu den anderen Methoden, die mit teuren kommerziellen Kits und solchen mit giftigen Chemikalien durchgeführt werden. Schließlich wird die beschriebene etablierte Methode wirksam zu Strategien für Pflanzenschutz- und Zertifizierungsprogramme für Tomatenpflanzen weltweit beitragen.