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Abstrakt
Eine hochempfindliche Nested-PCR zum Nachweis von Toxoplasma gondii in Tier- und Lebensmittelproben
Maria Vitale, Paola Galluzzo, Vittoria Currò, Kataryna Gozdzik, Domenico Schillaci und Vincenzo Di Marco Lo Presti
Toxoplasma gondii ist ein weltweit verbreiteter Parasit, der durch Nahrungsmittel und Wasser übertragen wird. Gewebe- und Fleischproben vieler Warmblüter können Gewebezysten von chronischer Toxoplasmose enthalten. Wasser und Gemüse können durch die parasitären Oozysten verunreinigt werden, die über den Kot infizierter Katzen ausgeschieden werden, die den Endwirt des Parasiten darstellen.
Eine empfindliche PCR zum Nachweis von Toxoplasma gondii wird beschrieben. Im ersten Schritt wurde die Region zwischen der 28S- und 18S-rDNA in den eng verwandten Parasiten T. gondii und Neospora caninum amplifiziert; die RFLP-Analyse unterschied die DNA der beiden morphologisch identischen Parasiten. Obwohl N. caninum bisher nicht an der Übertragung auf den Menschen beteiligt ist, ist es für die Tiergesundheit wichtig, da es eine Hauptursache für Fehlgeburten bei Rindern ist.
Die verschachtelte PCR wurde in einem Verdünnungstest in Schweinswurstproben verwendet, die mit T. gondii-Parasiten-DNA angereichert waren. Die Analyse zeigte, dass bis zu 200fg nachgewiesen werden konnten, was nur zwei einzelnen Parasiten entspricht. Eine ähnliche Nachweisgrenze für T. gondii kann mit Echtzeit-PCRs erreicht werden, aber Echtzeitmethoden erfordern spezielle Verbrauchsmaterialien und teure Geräte.